Questo capolavoro del gotico isabellino si deve a Enrique Egas. Da non perdere, all'interno, la spettacolare cancellata di Bartolomé de Jaén che chiude il transetto, dove si trovano i mausolei dei Re Cattolici, della loro figlia Giovanna la Pazza e di suo marito, oltre al magnifico retablo plateresco dell'altare maggiore. Il museo conserva oggetti di eccezionale valore storico e una straordinaria collezione di opere di maestri spagnoli, fiamminghi e italiani.